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ELISA試劑盒擁有兩大洗滌方法你可記清楚了

日期:2021-01-27瀏覽:1098次

   ELISA試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中AIF水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入AIF抗原、生物素化的抗小鼠AIF抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的AIF呈正相關。
  洗滌雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELISA靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。
  ELISA試劑盒洗滌的兩大方法:
  一、浸泡式
  1.吸干或甩干孔內反應液;
  2.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
  3.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;
  4.吸干孔內液體。吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
  5.重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。
  二、流水沖洗式
  初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗 2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

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