PCR檢測試劑盒引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
PCR檢測試劑盒采用聚合酶鏈式反應(PCR)技術(shù)檢測,可用于檢測各種待檢標本(如血液、糞便、食物、生物材料等)中所感染的特定細菌或病毒的某一特定基因,進而確定該細菌或病毒的感染/污染狀態(tài)。試劑盒中所含引物能特異性擴增該細菌或者病毒的保守區(qū)域,不會交叉擴增細胞基因組。與傳統(tǒng)的選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)檢測方法和免疫血清學檢測方法相比較,本方法更為快速,特異性更高。
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1、注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA段作為陽性對照。
2、標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3、用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4、在7號管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5、換槍頭,在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6、換槍頭,在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7、重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。