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日期:2024-05-21瀏覽:256次
HNP1-3 人中性粒細(xì)胞防御素1-3elisa應(yīng)用操作步驟:
夾心法,一般的操作步驟為:
將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體;
加入待測檢體,檢體中若含有待測的抗原,則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié);
洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原專一的一次抗體,與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié);
洗去多余未鍵結(jié)一次抗體,加入帶有酶的二次抗體,與一次抗體鍵結(jié);
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果;
間接法,一般的操作步驟為:
將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余的抗原。
加入待測檢體,檢體中若含有待測的一次抗體,則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。
洗去多余待測檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測的一次抗體鍵結(jié)。
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器測定塑膠盤中的吸光值,以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。
競爭法,其操作步驟為:
將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競爭法之由來。