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產(chǎn)品簡介:
產(chǎn)品型號:50T
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:535
更新時間:2024-09-06
線頸*線蟲PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
產(chǎn)品名稱 | 線頸*線蟲PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Nematodirus filicollisPCR |
貨號 | YS31159-R |
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標本結(jié)果判定:
(1)陽性:標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標本進行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
PCR實驗步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。
其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品:
Trypsin antibody原裝、分裝安倍生坦(標準品)
Legionella pneumophila antibody (FITC)原裝、分裝鹽決奈達隆
Apolipoprotein A II/ApoA-II antibody (HRP)原裝、分裝鹽決奈達隆
Helicobacter pylori antibody (FITC)原裝、分裝鹽決奈達隆
Influenza A Virus antibody原裝、分裝決奈達隆(標準品)
E. coli O + E. coli K antibody (FITC)原裝、分裝雷諾嗪
pan Endothelin antibody [3G10]原裝、分裝雷諾嗪
Listeria monocytogenes antibody (FITC)原裝、分裝雷諾嗪
EBV Nuclear Antigen/EBNA1 antibody原裝、分裝雷諾嗪(標準品)PRMT2/HMT1 antibody原裝、分裝鵝去氧膽
HOXB9 antibody原裝、分裝鵝去氧膽
C5b-9 + C5b-8 antibody [aE11]原裝、分裝鵝去氧膽
HOXC11 antibody原裝、分裝胰島素(牛)
SAP155 antibody原裝、分裝胰島素(牛)
hnRNPLL antibody原裝、分裝鈀碳催化
NFATC4 antibody原裝、分裝L-天門冬氨鉀
C4a antibody原裝、分裝L-天門冬氨鉀
C4b antibody原裝、分裝L-天門冬氨鉀
線頸*線蟲PCR檢測試劑盒Recombinant Human NTAL protein原裝、分裝依那普利-d5 叔基酯
Recombinant Human TTC11/FIS1 protein原裝、分裝依那普利-d5馬來鹽
Recombinant Human TTC11/FIS1 protein原裝、分裝依那普利
Recombinant Human TFIIB protein原裝、分裝依那普利
Recombinant Human TFIIB protein原裝、分裝2,4-二(三基硅基)-5-氟尿嘧啶
Recombinant Human Frataxin protein原裝、分裝氟脲苷-13C,15N2
Recombinant Human Frataxin protein原裝、分裝1,3-二芐基-5-氟尿嘧啶
Recombinant Human CRYZL1 protein原裝、分裝5-氟二嘧啶-2,4-二-13C,15N2
Recombinant Human CRYZL1 protein原裝、分裝1,3-二(芐氧基基)-5-氟尿嘧啶