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更新時間：2024-11-05

人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細胞

商品屬性：

細胞簡介：

人關(guān)節(jié)韌帶成纖維分離自關(guān)節(jié)韌帶組織；韌帶是纖維結(jié)締組織，將各個骨頭在關(guān)節(jié)處連接起來，并在關(guān)節(jié)活動時加固關(guān)節(jié)穩(wěn)定關(guān)節(jié)。其中顳下頜關(guān)節(jié)、踝關(guān) 節(jié)、膝關(guān)節(jié)韌帶組織研究較多，顳下頜關(guān)節(jié)兩側(cè)各有三條，即顳下頜韌帶、莖突下頜韌帶和蝶下頜韌帶。踝關(guān)節(jié)周圍韌帶根據(jù)其解剖位置可以分成3組，外側(cè)韌帶 ，內(nèi)側(cè)三角韌帶，脛腓聯(lián)合韌帶。膝關(guān)節(jié)的韌帶有囊外韌帶和囊內(nèi)韌帶,其共同作用為加強關(guān)節(jié)的穩(wěn)定性。囊外韌帶主要有:髕韌帶位于髕骨的下部，關(guān)節(jié)囊的前 方,是股四頭肌肌腱的延續(xù),向下附著于脛骨粗隆，兩側(cè)有側(cè)副韌帶加強；囊內(nèi)韌帶:主要為交叉韌帶:前交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起前份和股骨外側(cè)髁的內(nèi)側(cè)面 ，防止脛骨過度前移;后交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起后份與股骨內(nèi)側(cè)髁的外側(cè)面，防止脛骨過度后移。另外，在膝關(guān)節(jié)內(nèi)尚有膝橫韌帶。任何關(guān)節(jié)韌帶均可由于 外傷而發(fā)生損傷，但影響較大又較常見的是膝關(guān)節(jié)韌帶損傷和踝關(guān)節(jié)韌帶損傷。膝關(guān)節(jié)韌帶損傷，常見者為膝關(guān)節(jié)側(cè)副韌帶損傷。多因膝關(guān)節(jié)微屈時，突然受到 內(nèi)翻或外翻的沖擊力所致。踝關(guān)節(jié)韌帶損傷。多因行走或跑跳時誤入不平之處所致。以外側(cè)損傷多見。韌帶是致密纖維結(jié)締組織，主要特點是細胞、基質(zhì)成分少 ，纖維非常多、纖維粗大排列緊密，且排列方向與承受張力的方向一致，有很強的保護和支持作用。韌帶主要包含韌帶成纖維細胞。人關(guān)節(jié)韌帶成纖維對研究關(guān)節(jié)韌帶損傷有重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的人關(guān)節(jié)韌帶成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的人關(guān)節(jié)韌帶成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人關(guān)節(jié)韌帶成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　　④器官培養(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

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原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂??；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行