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更新時(shí)間:2024-11-05
犬臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
臍帶 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X8287 |
細(xì)胞簡介:
犬臍帶間充質(zhì)干分離自臍帶;臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)。原來是由羊膜包卷著卵黃囊和尿膜的柄狀伸長部而形成的。臍帶中通過尿膜的血管即臍動(dòng)脈和臍靜脈,卵黃囊的血管即臍腸系膜動(dòng)脈及臍腸系膜靜脈。當(dāng)卵黃囊及其血管退化,臍動(dòng)脈和臍靜脈就發(fā)達(dá)起來,在這些間隙中可以看到疏松的膠狀的間充質(zhì)。在子宮中,子宮動(dòng)脈在胎盤的母體部分出的毛細(xì)血管,與胎盤的子體部胎兒毛細(xì)血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進(jìn)行CO2和O2,代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動(dòng)脈將胎兒來的廢物運(yùn)送至胎盤,臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運(yùn)送給胎兒。后由子宮靜脈將來自胎兒的代謝廢物運(yùn)走,某種激素和抗體等也通過臍帶從母體移交給胎兒。臍帶中含有大量的干細(xì)胞,干細(xì)胞是生命的種子,它會(huì)分化成機(jī)體的各種細(xì)胞,結(jié)出各種不同的果實(shí)——血液細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、骨骼細(xì)胞等。干細(xì)胞是具有自我更新、高度增殖和多項(xiàng)分化潛能的細(xì)胞群體;這些細(xì)胞可以通過分裂維持自身細(xì)胞的特性和數(shù)量,又可進(jìn)一步分化為各種組織細(xì)胞,從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細(xì)胞。在不同的誘導(dǎo)條件下,可分化為多種造血細(xì)胞以外的組織細(xì)胞,并具有造血支持、免疫調(diào)節(jié)、組織修復(fù)等作用;目前,多用于風(fēng)濕免疫疾病的治療。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體干細(xì)胞,存在于骨髓、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織。它可分泌多種細(xì)胞因子及生長因子,促進(jìn)造血干細(xì)胞(HSC)的增殖與分化。MSCs還具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎和組織修復(fù)作用,可減輕移植物抗宿主?。?span>GVHD)及其他移植相關(guān)并發(fā)癥。
方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的犬臍帶間充質(zhì)干采用組織貼塊法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的犬臍帶間充質(zhì)經(jīng)CD90免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳3-5代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
犬臍帶間充質(zhì)干體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠溴脫氧核苷尿(BrdU)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISAKit ELISA. 96T/48T
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Humanmacrophagechemotaticfactor,MCFELISAKit 人巨噬細(xì)胞趨化因子(MCF)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
ChickenHerpessimplexvirusⅡaibody,HSVⅡ-Ab試劑盒雞單皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞CDK6蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次
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FSTL3/FLRG蛋白抗體
軟骨酸性蛋白1抗體
CD14重組小鼠 CD14 蛋白 Protein
CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule 0.5mgCD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule) 活化白細(xì)胞粘附分子抗原
CMA1重組人 CMA1 / Chymase 1 蛋白 Protein
CDC42 Protein Human 重組人 CDC42 / G25K 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
CD274 Protein Rat 重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
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CD14重組小鼠 CD14 蛋白 Protein
CD274 Protein Rat 重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
CMA1重組人 CMA1 / Chymase 1 蛋白 Protein
犬臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞大鼠白介素19(IL19)試劑盒 ,英文名: IL19 ELISA Kit
People with acridine orange (AO) ELISA Kit 人橙(AO)試劑盒
BovinesolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit ??扇苄园准?xì)胞分化抗原86(B7-2/sCD86)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforCK(HumanCreatineKinase)ELISAKit人肌酸激酶
細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物(linoleicacid)細(xì)胞流式分析試劑盒10次
RatBonemorphogeneticproteieceptor1A,BMPR-1AELISAKit大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行