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更新時間:2024-11-05
大鼠退行性椎間盤髓核細胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
椎間盤 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 梭形、多角形 | YS-01X8263 |
細胞簡介:
大鼠退行性椎間盤髓核分離退行性椎間盤組織;椎間盤是位于脊柱兩椎體之間,分為中央部的髓核,富于彈性的膠狀物質;周圍部的纖維環(huán),由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列。上下有軟骨板,是透明軟骨復蓋于椎體上,下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構成,位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,使纖維環(huán)成為堅實的組織,能承受較大的彎曲和扭轉負荷。髓核,是乳白色半透明膠狀體,富于彈性,為椎間盤結構的一部分,位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯的纖維網(wǎng)狀結構即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質構成的彈性膠凍物質。嬰幼兒時期的髓核含水量為80%-90%,即使到了老年,其含水量也在70%上下。髓核在出生時體積大而松散,位于椎間盤的中央,至成年時位置移至椎間盤的中后部;在成年以前構成髓核的主要物質是大量蛋白多糖復合體、膠原纖維和纖維軟骨,隨著年齡的增長,髓核中的蛋白多糖解聚增多,水分逐漸減少,膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
實驗室分離的大鼠退行性椎間盤髓核采用膠原酶-混合消化法并結合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的大鼠退行性椎間盤髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:基礎培養(yǎng)基,含FBS、EGF、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每3-4天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):梭形、多角形
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠退行性椎間盤髓核體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠半乳糖6酯酶試劑盒 小鼠半乳糖6酯酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠半乳糖6酯酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠半乳糖6酯酶試劑盒、小鼠半乳糖6酯酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
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小鼠基質金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human nerve protective factor (CVNPF) ELISA Kit 人神經(jīng)保護因子(CVNPF)試劑盒
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BHMT抗體
囊泡轉運蛋白SEC20 抗體
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白介素31(IL31)重組蛋白 Recombinant Interleukin 31 (IL31)
EPHA4 Protein Human 重組人 EphA4 蛋白 (His & Fc 標簽)
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CRIP2重組人 CRIP2 蛋白 Protein
大鼠退行性椎間盤髓核細胞大鼠白介素2可溶性受體(IL-2sR)試劑盒 ,英文名: IL-2sR ELISA Kit
Mouse ierleukin 7 (IL-7) ELISA Kit 小鼠白介素7(IL-7)試劑盒
ELISA 小鼠類胰島素生長因子結合蛋白-2(mouse IGBPF-2) 進口分裝
CLIAKitforIMA(MouseIschemiaModifiedAlbumin)ELISAKit小鼠缺血修飾白蛋白
通用型瓜類細菌性果斑病(西瓜果斑)(Acidovoraxavenaesubsp.ciulli;WatermelonFruitBlotch)試劑盒20次
ELISAKitINHBP大鼠抑制素結合蛋白